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重组噬菌体分离培养步骤？
重组噬菌体分离培养步骤？
分菌株对应的噬菌体分离过程步骤：
1、噬菌体分离
(1) 以新鲜鸽粪4g 加入100ml 普通液体培养基内，放入37 ℃温箱培养24h。
(2) 次日从中取出10ml70 ℃加热30min ,离心2000r/ 10min ,上清液用滤器过滤后保存于4 ℃冰箱备用。
(3) 在普通琼脂平板底面分别注明1、2、3 号。
(4)在1 号平板接种事先培养好的6h 幼龄菌乙型副伤寒杆菌一接种环；2 号平板接种幼龄菌福氏痢疾杆菌一接种环;3 号平板接种幼龄菌大肠杆菌一接种环,各平板的细菌密集涂布于琼脂平板表面。
(5) 再用无菌接种环取鸽粪培养滤液一接种环,分别滴加于3 个已接种细菌的平板中央,放入37 ℃温箱孵育24h。
2、噬菌体的分离和鉴定
先后从农贸市场采集各类海产品158 份, 分别用15 株假单胞菌作指示菌, 共分离到27 株噬菌体, 分离率为1711%。检出的噬菌体经实验室反复增殖、裂解等鉴定试验, 从中精选出9 株裂解力较强, 生物学性状较典型的噬菌体, 分别用双层琼脂法作单斑纯化培养。
这9 株噬菌体的噬菌斑圆形透明, 边缘有的整齐有的稍不整齐, 直径均在110～210 mm; 在电镜下的形态可见有头部和尾部, 均呈蝌蚪状; 增殖液的效价均可达10829pfum l。
3、噬菌体的分离
在有指示菌的双层琼脂平板上逐格滴加备用的待检噬菌体液,进行交叉裂解试验,即每一株菌均被所有待检噬菌体液逐一滴加。
待平皿干后,置37 ℃培养过夜。若有相应的噬菌体存在,即可在平皿上出现裂解噬斑(即为阳性) ,不裂解者为阴性。对分离到的每一噬菌体均经单噬斑分离纯化3 次以上,增殖后置4 ℃冰箱保存。
4、大连近海河流弧菌Ⅱ噬菌体的分离与研究
4.1 材料与方法
4.2 菌株
噬菌体分离所用的指示菌为河流弧菌29301 , 用于宿主范围测定的菌株共8 株: 河流弧菌Ⅱ9302 , 9401 , 9402 , 9403 , 9404 , 9501 , 9502 及9503 均为本实验室保存。
4.3 培养基
培养河流弧菌及噬菌体分离所用的培养基为海水胰蛋白胨培养基。其中: 胰蛋白胨10g , 酵母膏5g , 陈海水1000mL , pH712～715 。制作底层培养基时, 加琼脂15g ; 制作上层培养基时, 加琼脂7g。
4.4 样品的采集和噬菌体的分离
1996、1997 年两个夏季, 从大连市水产养殖公司所属皱纹盘鲍养殖区的不同地点采集海水和海底淤积物, 每次采集10 个样品, 每个样品为同一地点采集的3 份不同水样或海底淤积物混合而成。
为了分离噬菌体, 取海底淤积物100g , 加入等量海水, 充分振荡30min , 静置, 过滤, 取上清液100mL 加入50mL 3 倍浓缩的海水胰蛋白胨及2mL 浓度为1012个/ mL 的河流弧菌2 菌悬液, 30 ℃培养过夜, 以促进噬菌体的增殖。海水样品过滤后按上述方法直接富集。
经富集后的培养液加入1/ 10 的氯仿, 30 ℃静止1h , 于4000r/ min 离心20min , 取上清液用于双层琼脂法分离噬菌体。为了纯化噬菌体, 挑取单斑连续传代, 重复进行5 次以上, 选择平板上所有噬菌斑形态和大小基本一致的材料,进行下一步研究。
江浙沪有哪些适合自驾游的地方？
江浙沪有哪些适合自驾游的路线推荐：
江浙沪18条适合自驾游路线集合推荐
浙江：
1，环千岛湖自驾路线：
千岛湖，即新安江水库，位于浙江省杭州市淳安县境内，千岛湖与加拿大渥太华金斯顿千岛湖、湖北黄石阳新仙岛湖并称为世界三大千岛湖。被誉为“天下第一秀水”。
天下第一秀水，环湖自驾、环湖骑行公路路况较好，还有专业的骑行步道，沿途湖光山色、美不胜收。当地特色美食也是不能错过的。
2，四明山盘山公路自驾路线：
四明山盘山公路被誉为浙江最美盘山公路，浙江最美秋季自驾路线。
3，梦里水乡自驾路线：
浙江经典人文自驾路线，浙江这个江南水乡孕育了多样的水乡古镇，一路领略小桥流水人家的独特韵味。
4，浙南山水自驾路线：
浙南山水自驾路线浓缩了浙南山水精华，东南第一山雁荡山、田园风光的楠溪江、诗意山水的神仙居等
5，浙江滨海海岛自驾路线：
自驾路线：温州--洞头--温岭--台州--石浦渔港--中国渔村--松兰山度假区--宁波大榭岛--舟山跨海大桥--朱家尖景区--杭州湾跨海大桥--嘉兴--嵊泗岛 行程966公里
6，东方好莱坞自驾路线：
此路线是以横店影视城和象山影视城为主要目的地的自驾路线，体验一日穿越千年，打卡经典影视剧拍摄地点，观赏特色演出等。
7，安吉天荒坪盘山公路休闲避暑自驾路线：
安吉取《诗经》“安且吉兮”之意得名，中国夏季休闲百佳县，自驾休闲避暑的极佳之地。
江苏：
8，环太湖自驾路线：
太湖位于长江三角洲的南缘，古称震泽、具区，又名五湖、笠泽，是中国五大淡水湖之一，环湖一路领略苏州、无锡、宜兴、湖州的太湖风光。全程321公里。江苏的经典特色自驾路线。
9，江苏水乡主题自驾路线：
一路打卡江苏精华特色古镇水乡，小桥流水人家。周庄、同里、惠山古镇、千年古镇河下、西津渡等。
10，运河文化主题自驾路线：
京杭大运河穿江苏而过，沿途运河历史文化长廊古迹古镇众多，行程独特的运河沿线带主题经典自驾路线。
11，江苏滨海自驾路线：
沿着江苏沿海公路，经典滨海自驾之旅。一路自驾可吹着海风、看着浪花。有江苏一号公路之称。
12，溧阳1号公路自驾路线：
江苏最美自驾公路，又称彩虹公路，沿途200多个旅游景点，真是人在景中走，如在画中游。全程约360公里。
13，江苏长江文化自驾路线：
长江下游自南京--南通入海长江下游穿省而过，是一条欣赏长江下游绝美景色的特色自驾路线。
上海：
14：老沪杭公路（奉贤--金山）：金山最美环海公路
15：小洋山岛路线（临港--嵊泗）：
16：北沿公路（崇明）：贯穿整个崇明岛，非常适合自驾和骑行。
17：塘下公路（浦东）：浦东最美自驾公路
18：黄金旅游线自驾路线：上海--苏州--湖州--杭州--富阳--桐庐--千岛湖--黄山--婺源